滅菌具體方法(滅菌的具體方法)
1.滅菌的具體方法有哪些
(1)加熱滅菌法 利用高溫來殺死微生物（超過最高生長溫度）的方法。
加熱滅菌的原理：當高溫作用于微生物時，首先引起細胞內(nèi)生理生化反應(yīng)速率加快，機體內(nèi)對溫度敏感的物質(zhì)如蛋白質(zhì)、核酸等，隨著溫度的增高而遭受不可逆的破壞，盡而導(dǎo)致細胞內(nèi)原生質(zhì)體的變化、酶結(jié)構(gòu)的破壞，從而使細胞失去了生活機能上的協(xié)調(diào)，停止了生長發(fā)育。隨著高溫的繼續(xù)作用，細胞內(nèi)原生質(zhì)便發(fā)生凝固，酶結(jié)構(gòu)完全破壞，活動消失，生化反應(yīng)停止，滲透交換等新陳代謝活動消失，細胞死亡。
加熱滅菌可分干熱滅菌和濕熱滅菌兩大類。 1）干熱滅菌 利用灼燒或干熱空氣滅菌而沒有飽和水蒸氣參加的滅菌法稱為干熱滅菌法。
由于干熱滅菌使用方便，方法簡單，故在生產(chǎn)上廣泛應(yīng)用。如火焰滅菌法：直接利用火焰把微生物燒死，故又稱焚燒滅菌法。
采用此法滅菌既徹底又迅速，但只適用于金屬制的接種工具、試管口及污染物品等的處理。熱空氣滅菌法：即在電熱恒溫干燥箱中利用干熱空氣來滅菌。
2）濕熱滅菌 即利用蒸汽進行滅菌的方法。濕熱滅菌又分為高壓、常壓、間歇滅菌和巴氏滅菌4種。
①高壓蒸汽滅菌 由于高壓蒸汽具有較強的穿透力和較常壓高的溫度，能大大縮短滅菌時間，提高工作效率，加之蛋白質(zhì)在濕熱條件下容易變性，在熱蒸汽條件下，細菌的芽孢在120℃，經(jīng)20~30分鐘可全部被殺死。如滅菌材料體積較大，不易被穿透時，可將壓力增加到0.152兆帕，延長至1~2小時。
在高壓蒸汽滅菌中，滅菌溫度隨蒸汽壓力的增加而升高（圖2-6）。 圖2-6 高壓蒸汽滅菌鍋 在使用高壓滅菌鍋時，要完全排出鍋內(nèi)的空氣而以飽和蒸汽代之。
如果空氣不排除干凈，則鍋內(nèi)溫度將低于同樣壓力下由純飽和蒸汽產(chǎn)生的溫度，影響滅菌效果。 此法適用于各種耐熱物品的滅菌，如一般培養(yǎng)基、生理鹽水等各種溶液、玻璃器皿、工作服等。
所采用的蒸汽壓力與時間，應(yīng)根據(jù)待滅菌物品的性質(zhì)、體積與容器類型等決定。 ②常壓蒸汽滅菌 這是采用自然壓力、100℃蒸汽進行滅菌的方法。
它設(shè)備簡單、成本低，當前使用最廣泛。只要砌一個爐灶，買1~2只大鍋，上面用磚和水泥砌成，也可用大鐵桶、木桶等，體積大小可自行決定，但不宜過大，以裝800~1500瓶為好。
設(shè)計常壓灶時應(yīng)注意的問題：大小根據(jù)生產(chǎn)規(guī)模來定，灶頂部最好制成拱圓形，這樣冷凝水可沿灶的內(nèi)壁下流而不會打濕棉塞；灶倉內(nèi)要有層架結(jié)構(gòu)，以便分層裝入滅菌物；灶上應(yīng)安裝溫度計，可隨時觀察灶內(nèi)溫度的變化；因滅菌時間長，鍋內(nèi)水不夠蒸發(fā)，故容量大的灶要安裝加水裝置；灶倉的密閉程度要盡可能高，這樣既提高滅菌效果，又節(jié)省燃料。菇農(nóng)在生產(chǎn)中還常用一種小型蒸汽發(fā)生裝置，引出蒸汽后直接通到下邊用木條塹起、四周用多層塑料布密封的菌袋堆中進行常壓滅菌。
這種方法不用建灶，簡便省工（圖2-7）。常壓滅菌一般水燒開后保持8~10小時，悶一夜即可。
圖2-7 簡易常壓滅菌法 ③常壓間歇蒸汽滅菌法 這是利用常壓蒸汽反復(fù)幾次滅菌的方法。具體做法是將待滅菌物品放在鍋內(nèi)，100℃處理1小時左右，殺死微生物的營養(yǎng)細胞，讓其冷卻至30℃左右，此時芽胞會萌發(fā)，再以同樣方法加熱處理，反復(fù)3次，可達到滅菌目的。
該方法可用于不耐高溫的藥品、營養(yǎng)物、特殊培養(yǎng)基的滅菌。 ④低溫巴氏滅菌法 即在60~70℃下，經(jīng)一定時間，殺死有害微生物的方法。
適應(yīng)于不耐高溫的物品消毒。有些培養(yǎng)基，在高溫下遭到破壞，用此法既可殺死致病微生物的營養(yǎng)體，又能使培養(yǎng)基的成分不致受到嚴重破壞。
食用菌生產(chǎn)中培養(yǎng)料堆積發(fā)酵工藝，就是利用這個原理殺死其中的病蟲、雜菌。 （2）過濾除菌法 又分液體過濾和空氣過濾兩種，就是采用機械的方法，設(shè)計一種濾孔比細菌還小的篩子，做成各種過濾器，通過機械過濾，只讓液體培養(yǎng)基或空氣從篩孔流出，各種微生物菌體則留在篩子上，從而達到除菌的目的。
這種方法適用于對熱不穩(wěn)定的體積小的液體培養(yǎng)基（如動物血清、蛋白質(zhì)、酶、維生素等）及氣體的滅菌。超凈工作臺的工作原理就是將帶菌空氣通過過濾滅菌形成無菌空氣，從風(fēng)洞中吹出，來造成工作臺范圍的無菌狀態(tài)。
過濾滅菌的最大優(yōu)點是不破壞培養(yǎng)基中各種物質(zhì)的化學(xué)成分。常用的過濾器有用硅藻土制的、石棉制的、陶瓷土制的，也有用火棉膠、硝化纖維素濾膜制成的。
（3）輻射滅菌法 利用輻射產(chǎn)生的能量進行殺菌的方法稱輻射滅菌。輻射可分電離輻射和非電離輻射兩種，α-射線、β-射線、γ-射線、X-射線、中子和質(zhì)子、微波等屬電離輻射，紫外線、臭氧、日光為非電離輻射。
1）紫外線滅菌 紫外線殺菌的原理是利用紫外線的輻射作用。用燈管直接照射細菌使其發(fā)生光化學(xué)反應(yīng)，將細菌細胞質(zhì)誘導(dǎo)形成胸腺嘧啶雙聚體，從而抑制DNA的復(fù)制而發(fā)生變性、致死。
另一方面，空氣在紫外線照射下產(chǎn)生的臭氧（O3），也具有一定的殺菌作用。紫外線的有效作用距離為1.2~2.0米。
紫外燈一般懸吊在接種室或培養(yǎng)室的上方，個數(shù)依房間大小而定，容1~2個人操作的接種室，安裝一個30瓦的紫外燈就可以了。在每次接種前，應(yīng)將所需的器具一起放入接種室（箱）內(nèi)，然后打開紫外燈照射。
如果接種室體積較大，開燈照射2小時。
2.滅菌方法有哪些
1.干熱滅菌法
1.1灼燒與火焰滅菌：灼燒主要是用于接種工具滅菌，在火焰上灼燒即可達到徹底滅菌，火焰滅菌通常用于無菌操作中，將試管口、玻璃瓶口、硅氟塑料塞等反復(fù)通過火焰數(shù)次，利用火焰對管口等進行滅菌，阻止管口污染，作為無菌操作過程中的輔助滅菌手段。
1.2干烤滅菌：利用熱輻射及干熱空氣進行滅菌。一般將待檢滅菌的物品如金屬、玻璃、陶瓷制品包裝后，均可在烤箱內(nèi)干熱滅菌。通常加熱至160℃，保溫2h可完全滅菌。但不宜超過170℃，玻璃量具易變形。降溫過速，驟冷易引起玻璃器皿炸裂。干熱滅菌時裝入干烤箱內(nèi)的物品切勿緊密，應(yīng)有空隙，利于熱空氣流動，過密，致使溫度不均，部分物品滅菌不徹底。
2.濕熱滅菌法
通過加壓提高蒸汽溫度，用高壓蒸汽滅菌，穿透力強，溫度高，滅菌效果最好。
注意事項：1.完全排除高壓滅菌器內(nèi)的冷空氣。有冷空氣存在時，在同一表壓下所達到的溫度值要低，而冷空氣排出越少，溫度就低得越多。在高壓蒸汽滅菌時，為保證達到規(guī)定的溫度，必須將冷空氣完全排除。否則，雖然壓力達到，而溫度達不到規(guī)定的要求，滅菌就不徹底。
3.紫外線 殺菌譜廣，但穿透力弱，影響因素多，殺菌效能受到一定限制。
紫外線消毒效果與紫外線強度、照射時間、溫度與濕度等因素有關(guān)。
我國規(guī)定紫外燈照射強度距離1m處不低于70μw/cm2。一般紫外燈使用超過100h，則應(yīng)更換。表面有塵土，降低滅菌效果。紫外燈殺菌的溫度以20~40℃，相對濕度40%~60%為宜。
3.常用的滅菌方法有哪些
原發(fā)布者：honey_琴
常用滅菌方法簡介一、輻射滅菌法本法系指滅菌物品置于適宜放射源輻射的γ射線或適宜的電子加速器發(fā)生的電子束中進行電離輻射而達到殺滅微生物的方法。本法最常用的60Co-γ射線輻射滅菌。醫(yī)療器械、容器、生產(chǎn)輔助用品、不受輻射破壞的原料藥及成品等均可用本法滅菌。采用輻射滅菌法滅菌后的產(chǎn)品其SAL應(yīng)《10-6。γ射線輻射滅菌所控制的參數(shù)主要是輻射劑量（指滅菌物品的吸收劑量）。該劑量的制定應(yīng)考慮滅菌物品的適應(yīng)性及可能污染的微生物最大數(shù)量及最強抗輻射力，事先應(yīng)驗證所使用的劑量不影響被滅菌物品的安全性、有效性及穩(wěn)定性。常用的輻射滅菌吸收劑量為25KGy。對最終產(chǎn)品、原料藥、某些醫(yī)療器材應(yīng)盡可能采用低輻射劑量滅菌。滅菌前，應(yīng)對被滅菌物品微生物污染的數(shù)量和抗輻射強度進行測定，以評價滅菌過程賦予該滅菌物品的無菌保證水平。滅菌時，應(yīng)采用適當?shù)幕瘜W(xué)或物理方法對滅菌物品吸收的輻射劑量進行監(jiān)控，以充分證實滅菌物品吸收的劑量是在規(guī)定的限度內(nèi)。如采用與滅菌物品一起被輻射的放射性劑量計，劑量計要置于規(guī)定的部位。在初安裝時劑量計應(yīng)用標準源進行校正，并定期進行再校正。60Co-γ射線輻射滅菌法常用的生物指示劑為短小芽孢桿菌孢子（）。二、干熱滅菌法本法系指將物品置于干熱滅菌柜、隧道滅菌器等設(shè)備中，利用干熱空氣達到殺滅微生物或消除熱原物質(zhì)的方法。適用于耐高溫但不宜用濕熱滅菌法滅菌的物品滅菌，如玻璃器
4.常用的消毒滅菌的方法有哪些
消毒滅菌的方法 （一）物理消毒滅菌法 利用物理因子殺滅微生物的方法.包括熱力消毒滅菌、輻射消毒、空氣凈化、超聲波消毒和微波消毒等。
1.熱力消毒滅菌 高溫能使微生物的蛋白質(zhì)和酶變性或凝固（結(jié)構(gòu)改變導(dǎo)致功能喪失），新陳代謝受到障礙而死亡，從而達到消毒與滅菌的目的.在消毒中，熱可分為濕熱與干熱兩大類。 干熱是指相對濕度在20%以下的高熱，干熱消毒滅菌是由空氣導(dǎo)熱，傳熱效果較慢.一般繁殖體在干熱80-100℃中經(jīng)1小時可以殺死，芽胞需160-170℃經(jīng)2小時方可殺死。
（1）燃燒法 是一種簡單、迅速、徹底的滅菌方法，因?qū)ξ锲返钠茐男源?，故?yīng)用范圍有限。 燒灼法：一些耐高溫的實驗器械（金屬、搪瓷類），在急用或無條件用其他方法消毒時可采用此法.將器械放在火焰上燒灼1-2分鐘.若為搪瓷容器，可倒少量95%乙醇，慢慢轉(zhuǎn)動容器，使乙醇分布均勻，點火燃燒至熄滅約1-2分鐘.采集作細菌培養(yǎng)的標本時，在留取標本前后（即啟蓋后，閉蓋前）都應(yīng)將試管（瓶）口和蓋子置于火焰上燒灼，來回旋轉(zhuǎn)2-3次。
燃燒時要注意安全，須遠離易燃易爆物品，如氧氣、汽油、乙醚等.燃燒過程不得添加乙醇，以免引起火焰上竄而致灼傷或火災(zāi).銳利刀剪為保護刀鋒，不宜用燃燒滅菌法。 焚燒：某些特殊感染，如破傷風(fēng)、氣性壞疽、綠膿桿菌感染的敷料，以及其它已污染且無保留價值的物品，如污紙、垃圾等，應(yīng)放入焚燒爐內(nèi)焚燒，使之炭化。
（2）干烤法 電熱烤箱：利用烤箱的熱空氣消毒滅菌。烤箱通電加熱后的空氣在一定空間不斷對流，產(chǎn)生均一效應(yīng)的熱空氣直接穿透物體.一般繁殖體在干熱80-100℃中經(jīng)1小時可以殺死，芽胞、病毒需160-170℃經(jīng)2小時方可殺死.熱空氣消毒滅菌法適用于玻璃器皿、瓷器以及明膠海棉、液體石臘、各種粉劑、軟膏等.滅菌后待箱內(nèi)溫度降至50-40℃以下才能開啟柜門，以防炸裂。
微波消毒：微波是一種高頻電磁波，其殺菌的作用原理，一為熱效應(yīng)，所及之處產(chǎn)生分子內(nèi)部劇烈運動，使物體里外濕度迅速升高；一為綜合效應(yīng)，諸如化學(xué)效應(yīng)、電磁共振效應(yīng)和場致力效應(yīng)。目前已廣泛應(yīng)用于食品、藥品的消毒，用微波滅菌手術(shù)器械包、微生物實驗室用品等亦有報告.若物品先經(jīng)1%過氧乙酸或0.5%新潔爾滅濕化處理后，可起協(xié)同殺菌作用，照射2分鐘，可使殺芽胞率由98.81%增加到99.98%-99.99%。
微波對人體有一定危害性，其熱效應(yīng)可損傷眼睛晶狀體等，長時間照射還可致神經(jīng)功能紊亂.使用時可設(shè)置不透微波的金屬屏障或戴特制防護眼境等。 濕熱消毒滅菌 由空氣和水蒸氣導(dǎo)熱，傳熱快，穿透力強，濕熱滅菌法比干熱滅菌法所需溫度低、時間短。
（1）煮沸法 將水煮沸至100℃，保持5-10分鐘可殺滅繁殖體，保持1-3小時可殺滅芽胞.在水中加入碳酸氫鈉至1%-2%濃度時，沸點可達105℃，能增強殺菌作用，還可去污防銹.在高原地區(qū)氣壓低、沸點低的情況下，要延長消毒時間（海拔每增高300m，需延長消毒時間2分鐘）.此法適用于不怕潮濕耐高溫的搪瓷、金屬、玻璃、橡膠類物品。 煮沸前物品涮洗干凈，打開軸節(jié)或蓋子，將其全部浸入水中.大小相同的碗、盆等均不能重疊，以確保物品各面與水接觸.銳利、細小、易損物品用紗布包裹，以免撞擊或散落.玻璃、搪瓷類放入冷水或溫水中煮；金屬、橡膠類則待水沸后放入.消毒時間均從水沸后開始計時.若中途再加入物品，則重新計時，消毒后及時取出物品，保持其無菌狀態(tài)。
經(jīng)煮沸滅菌的物品.“無菌”有效期不超過6小時。 （2）高壓蒸汽滅菌法 高壓蒸汽滅菌器裝置嚴密，輸入蒸汽不外逸，溫度隨蒸汽壓力增高而升高，當壓力增至103-206kPa時，濕度可達121.3-132℃.高壓蒸汽滅菌法就是利用高壓和高熱釋放的潛熱進行滅菌，為目前可靠而有效的滅菌方法.適用于耐高溫、高壓，不怕潮濕的物品，如敷料、手術(shù)器械、藥品、細菌培養(yǎng)基等。
潛熱是指當lg100℃的水蒸汽變成lg100℃水時，釋放出2255.2J的熱量。 高壓蒸汽滅菌的關(guān)鍵問題是為熱的傳導(dǎo)提供良好條件，而其中最重要的是使冷空氣從滅菌器中順利排出.因為冷空氣導(dǎo)熱性差，阻礙蒸汽接觸欲滅菌物品，并且還可減低蒸汽分壓使之不能達到應(yīng)有的溫度。
手提式高壓蒸汽滅菌器：為金屬圓筒，分為二層，隔層內(nèi)盛水，有蓋，可以旋緊，加熱后產(chǎn)生蒸汽。鍋外有壓力表，當蒸汽壓力升高時，溫度也隨之相應(yīng)升高。
該滅菌器體積小，可自發(fā)蒸汽，便于攜帶。 操作方法如下：在滅菌器中盛水3000ml；將擬滅菌的物品隨同盛裝的桶放入滅菌器內(nèi)；將蓋子上的排氣軟管插于鋁桶內(nèi)壁的的方管中；蓋好蓋子，擰緊元寶螺絲，勿使漏氣；鍋下加熱，打開排氣活門，放出冷空氣（一般在水沸后排氣10-15分鐘左右），關(guān)閉放氣活門，使壓力逐漸上升至103kPa，溫度達121.3℃，維持20分鐘后，排氣至“0”時，慢慢打開蓋子.如果突然開蓋，冷空氣大量進入，蒸汽凝成水滴，使物品潮濕，且玻璃類易發(fā)生爆裂。
臥式高壓蒸汽滅菌器：其結(jié)構(gòu)原理同手提式高壓蒸汽滅菌器，因其體積大，一次可滅菌大量物品.操作人員須經(jīng)專業(yè)培訓(xùn)，再關(guān)閉放氣開關(guān)，待夾層壓力表達到滅菌所需壓力時（約10分鐘后），將蒸汽控制閥移至“消毒”位置，使蒸汽。
5.滅菌方法有哪些
1.干熱滅菌法1.1灼燒與火焰滅菌：灼燒主要是用于接種工具滅菌，在火焰上灼燒即可達到徹底滅菌，火焰滅菌通常用于無菌操作中，將試管口、玻璃瓶口、硅氟塑料塞等反復(fù)通過火焰數(shù)次，利用火焰對管口等進行滅菌，阻止管口污染，作為無菌操作過程中的輔助滅菌手段。
1.2干烤滅菌：利用熱輻射及干熱空氣進行滅菌。一般將待檢滅菌的物品如金屬、玻璃、陶瓷制品包裝后，均可在烤箱內(nèi)干熱滅菌。
通常加熱至160℃，保溫2h可完全滅菌。但不宜超過170℃，玻璃量具易變形。
降溫過速，驟冷易引起玻璃器皿炸裂。干熱滅菌時裝入干烤箱內(nèi)的物品切勿緊密，應(yīng)有空隙，利于熱空氣流動，過密，致使溫度不均，部分物品滅菌不徹底。
2.濕熱滅菌法通過加壓提高蒸汽溫度，用高壓蒸汽滅菌，穿透力強，溫度高，滅菌效果最好。注意事項：1.完全排除高壓滅菌器內(nèi)的冷空氣。
有冷空氣存在時，在同一表壓下所達到的溫度值要低，而冷空氣排出越少，溫度就低得越多。在高壓蒸汽滅菌時，為保證達到規(guī)定的溫度，必須將冷空氣完全排除。
否則，雖然壓力達到，而溫度達不到規(guī)定的要求，滅菌就不徹底。3.紫外線 殺菌譜廣，但穿透力弱，影響因素多，殺菌效能受到一定限制。
紫外線消毒效果與紫外線強度、照射時間、溫度與濕度等因素有關(guān)。我國規(guī)定紫外燈照射強度距離1m處不低于70μw/cm2。
一般紫外燈使用超過100h，則應(yīng)更換。表面有塵土，降低滅菌效果。
紫外燈殺菌的溫度以20~40℃，相對濕度40%~60%為宜。
